RESUMO
Las técnicas de diagnóstico molecular por PCR permiten distinguir entre las diferentes especies de Cryptosporidium morfológicamente idénticas capaces de infectar a humanos. De las 23 especies actualmente reconocidas en el género, al menos 9 son capaces de infectar a humanos. Por ello, y debido a que la intensidad de las manifestaciones clínicas, la patogenicidad, la excreción de ooquistes y la incidencia varían entre ellas, la realización de estudios moleculares es crucial para una mejor comprensión de la epidemiología de la criptosporidiosis humana. En el presente trabajo se analizan muestras procedentes de 2 estudios independientes: uno formado por 23 muestras procedentes de Madrid y otro compuesto por 72 muestras procedentes de La Coruña, todas ellas positivas para Cryptosporidium spp. por métodos microscópicos y pertenecientes a casos aislados de criptosporidiosis. Para la identificación a nivel de especie se utilizaron las regiones de diagnóstico descritas para el ADNr 18S y las regiones de diagnóstico del gen de la COWP. De las 95 muestras analizadas, se consiguió extraer y amplificar ADN en 77 casos, en los que las especies causantes de la infección fueron: C. parvum (40 casos: 2 Madrid y 38 La Coruña), C. hominis (30 casos: 10 Madrid y 20 La Coruña) y C. meleagridis (2 casos: uno Madrid y uno La Coruña). En otros 5 casos fue imposible detectar la especie responsable de la infección, aunque se confirmara su positividad por PCR (4 Madrid y uno La Coruña). Los genotipos aislados en estos pacientes se correlacionaron con los hallados en animales de las mismas regiones (AU)
Molecular PCR based diagnostic techniques have enabled us to distinguish between the different, morphologically identical, Cryptosporidium species that can infect humans. Of the 23 recognized species in the genus, at least 9 are able to infect humans. As the intensity of the clinical manifestations, pathogenicity, excretion of oocysts, and incidence, are different between this species, molecular studies are crucial for a better understanding of the epidemiology of human cryptosporidiosis. Samples form two independent studies are analyzed in this publication. One included 23 samples from Madrid, and the other, 72 samples from La Coruña. All of them positive for Cryptosporidium spp. by microscopic methods and belonging to isolated cases of human cryptosporidiosis. For the identification of the species responsible for the infection, the 18S rDNA diagnostic region and the COWP gene diagnostic regions were used. Out of the 95 samples tested, in 77 cases we were able to extract and amplify DNA. In those cases the species responsible for the infection were: C. parvum (40 cases, 2 Madrid and 38 La Coruña), C. hominis (30 cases, 10 Madrid and 20 La Coruña) and C. meleagridis (2 cases, 1 Madrid and 1 La Coruña). In 5 samples it was impossible to detect the species responsible for the infection, but their positivity was confirmed by PCR (4 Madrid and 1 La Coruña). The genotypes of the isolates from patients correlated well with animals from the same regions
Assuntos
Humanos , Cryptosporidium parvum/isolamento & purificação , Cryptosporidium/isolamento & purificação , Criptosporidiose/epidemiologia , Técnicas de Diagnóstico Molecular/métodos , Enteropatias Parasitárias/genética , Fezes/microbiologiaRESUMO
Cyclospora cayetanensis adquiriu importância por causar surtos e casos esporádicos de diarréia em todo o mundo, associados a alimentos. No Brasil, até 1999 nenhum surto de ciclosporíase havia sido registrado. O objetivo deste trabalho é apresentar os resultados da investigação do surto de Cyclospora cayetanensis ocorrido no período de setembro a dezembro de 2000, em General Salgado (SP), associado ao sistema de abastecimento público de água da cidade. Um estudo descritivo foi conduzido para identificar a fonte de transmissão, com entrevistas de pacientes, análise dos registros de diarréia dos anos anteriores, inspeções sanitárias dos sistemas de água e esgoto, exames laboratoriais de amostras de fezes dos pacientes, dos alimentos suspeitos e da água do sistema. Caso clínico compatível foi definido como o indivíduo com diarréia líquida e pelo menos mais três dos sintomas gastrintestinais, como náusea, vômito, flatulência, dor abdominal, perda de peso ou diarréia prolongada, residente em General Salgado durante o período do surto. Casos confirmados foram definidos como aqueles com oocistos típicos nas amostras de fezes. Amostras clínicas e de alimentos foram analisadas pelo Instituto Adolfo Lutz. Amostras de água foram testadas pelo CDC/Atlanta por técnica de PCR. Foram identificados 350 casos envolvidos no surto (taxa de incidência = 32,3 casos/1.000 habitantes), dos quais crianças menores de 4 anos constituíram o grupo mais afetado (taxa de incidência = 49,1 casos/1.000 habitantes). Dos 40 casos testados para bactéria, vírus e parasita dez foram positivos para Cyclospora cayetanensis. O sistema público de água era composto de 15 poços artesianos com infiltração de águas pluviais e esgoto. A água do poço de número 7 foi positiva para Cyclospora cayetanensis. Para controlar o surto, mudanças importantes foram necessárias no sistema de abastecimento público de água e esgoto. Medidas educacionais, monitoramento da diarréia aguda, testes laboratoriais...
Assuntos
Brasil , Cyclospora , Surtos de Doenças , Monitoramento Epidemiológico , Parasitologia de Alimentos , Infecções por Protozoários , Abastecimento de ÁguaRESUMO
Mundialmente, diferentes espécies de Cryptosporidium estão relacionadas com doenças diarréicas. No Brasil há poucos dados sobre os genótipos das espécies de Cryptosporidium associadas a infecções. OBJETIVO: No presente estudo, caracterizamos, por métodos moleculares, a espécie e o genótipo de Cryptosporidium sp diagnosticado em surto diarréico ocorrido na creche do Hospital das Clínicas, São Paulo, Brasil. MATERIAL E MÉTODOS: Identificação específica e tipagem dos isolados associados ao surto foram feitos a partir do seqüenciamento de fragmentos de DNA amplificados por PCR dos seguintes loci: a região que codifica o SSUrRNA, o gene que codifica uma proteína do envoltório dos oocistos de Cryptosporidium (COWP), e o locus de microsatélite ML1, representado por seqüências repetitiva de três nucleotídeos GAG contendo substituições que diferem entre os genótipos de Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis. RESULTADOS: Um total de 29 amostras positivas para Cryptosporidium associadas ao surto diarréico foi analisado com base nos métodos moleculares acima descritos. O estudo revelou a presença do genótipo ML1 de Cryptosporidium hominis. DISCUSSÃO: A análise molecular reforçou a hipótese de que a transmissão de Cryptosporidium hominis durante o surto diarréico ocorreu de pessoa a pessoa através da rota fecal oral. Esta é a primeira vez que ferramentas moleculares são utilizadas para identificação de espécies e genótipos de isolados acusando a presença do genótipo ML1 em pacientes brasileiros.
Assuntos
Humanos , Animais , Masculino , Feminino , Lactente , Pré-Escolar , Criptosporidiose/parasitologia , Cryptosporidium/genética , Diarreia/parasitologia , Brasil/epidemiologia , Creches , Criptosporidiose/epidemiologia , Surtos de Doenças , Diarreia/epidemiologia , Diarreia/genética , Genótipo , Fatores de RiscoRESUMO
Comunicamos la identificación, a nivel de especie, de un microsporidio aislado en cultivo celular a partir de un lavado broncoalveolar de un paciente con Sida y neumonía. La caracterización del aislado se realizó mediante: 1) estudio morfológico de microscopía óptica y electrónica, 2) estudio inmunológico con antisuero específicos, inmunofluorescencia indirecta (IFI) e inmunoblot (WB) y 3) estudio molecular tras reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con iniciadores especie-específicos diseñados a partir de la región que codifica la subunidad menor del ARN ribosomal. Las características ultraestructurales del aislado permitieron su identificación en el género Encephalitozoon. La identificación específica del microsporidio como Encephalitozoon hellem se realizó mediante IFI y WB, empleando suero policlonal de conejo anti-E. hellem (CDC:0291:V213), y mediante la amplificación por PCR del fragmento diagnóstico utilizando el par de iniciadores EHELF/EHELR específicos para esta especie. El aislado ha sido denominado EHVS-96 y se mantiene en cultivo continuo en células Vero-E6. Este es el primer aislamiento en cultivo y caracterización de E. hellem en España
Assuntos
Humanos , Masculino , Adulto , Encephalitozoon/isolamento & purificação , Pneumonia/parasitologia , Síndrome de Imunodeficiência Adquirida/parasitologia , Técnicas de Cultura de Células , Encephalitozoon/patogenicidade , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Soros Imunes , Microscopia Eletrônica , Microsporidiose/diagnóstico , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
Enterocytozoon bieneusi e o mais comum microsporidio agente de infeccoes gastrointestinais que ocorre predominantemente em pessoas com AIDS. Em todo o mundo os microsporidios sao reconhecidos como importantes patogenos oportunistas, entretanto poucos casos ja foram diagnosticados no Brasil, provavelmente devido ao pouco conhecimento do quadro clinico que os agentes produzem ou a dificuldades no diagnostico laboratorial. No presente trabalho relatamos o caso de um paciente brasileiro HIV-positivo acompanhado durante 3 anos, em que foram detectados esporos de microsporidios nas fezes, identificados como Enterocytozoon bieneusi por microscopia eletronica e PCR. O paciente apresentava diarreia cronica, contagem de linfocitos CD4 abaixo de 100/mm3 e fez uso de albendazol em diferentes ocasioes com melhora transitoria da diarreia, que reaparecia logo que a droga era suspensa...
